Аналіз калу на хелікобактер пілорі: як здавати на антиген, достовірність

Зміст

• Що являє собою бактерії?
• Кому рекомендується перевірити аналіз калу на хеликобактерию?
• Спосіб бактеріологічного посіву
• Імунологічні способи дослідження
• Метод ПЛР
• Як оцінити результати аналізів?
• Як підготуватися до здачі аналізу?
• Додаткові дослідження

Позитивний результат аналізу калу на хелікобактер служить достовірним доказом зараження людини. Дослідження відноситься до прямих видами, коли виявляється конкретний збудник або його ДНК, а не наслідки його дії або продукти розпаду (як при проведенні імунологічних аналізів крові).

Крім того, перевагою способу є його неінвазивність — відсутність необхідності застосовувати для забору матеріалу більш або менш травматичні процедури (проколу вени для взяття крові, введення дуоденального зонда).

Проведення аналізу калу не пов’язано з присутністю пацієнта, досить своєчасної доставки в лабораторію випорожнень. Це особливо важливо для обстеження дітей.

Існують різні методики виявлення Helicobacter pylori, кожна володіє своїми достоїнствами і недоліками.

Лікар визначає необхідність і вибір способу дослідження. Чимале значення має доступність аналізу для конкретного пацієнта із-за ціни. Велика частина виконується тільки в приватних клініках і лабораторіях, оскільки вимагає дорогого устаткування.

Мета дослідження — виявлення причинного зв’язку захворювання з хелікобактер і цільового призначення курсу лікування для позбавлення від збудника.

Що являє собою бактерії?

Назву Helicobacter pylori перекладається як «спіралеподібна прівратніковой». Воно прив’язане до характерною формою бактерії, локалізації в області воротаря (прикордонна зона шлунка з дванадцятипалої кишкою). Мікроорганізм має джгутики, що допомагають йому переміщатися навіть в густого слизу.

Бактерії здатна витримувати кисле середовище шлункового соку. Для життєзабезпечення використовує енергію молекул водню, яку виробляють кишкові бактерії.

Бактерія синтезує біля 20 ферментів

Найбільш відомі ферменти хелікобактер:

• оксидаза,
• уреаза,
• каталаза.

До особливостей мікроорганізму відносяться:

• складність виділення культуральним способом, оскільки бактерії не росте на звичайних поживних середовищах;
• тривалий період відсутності симптоматики, що вказує на зараження;
• можливість в «небезпечній» ситуації трансформуватися в кулясту форму і покриватися захисною плівкою.

Агресивність бактерії є основною причиною атрофічної форми хронічного гастриту з подальшим переходом на виразкову хворобу й ракову пухлину.

В кале спіралевидну форму виявити неможливо, оскільки кишкова середовище несприятливе для існування хелікобактер. Тут не мається потрібної кислотності, мало кисню, діють сильні руйнують ферменти жовчі, підшлункової залози. Тому в калових масах знаходиться кокова форма бактерії.

Кому рекомендується перевірити аналіз калу на хеликобактерию?

Симптоми ураження шлунка, викликані хелікобактер, можуть бути мінімальними або відповідати клініці загострення захворювання. У пацієнта спостерігаються:

• здуття живота;
• відрижка;
• печія;
• больовий синдром, особливо при загостреннях навесні і восени;
• запори або проноси;
• відчуття тяжкості в епігастрії;
• зниження апетиту;
• різке падіння ваги.

Показаннями до дослідження можуть бути:

• необхідність перевірки перед тривалим курсом терапії нестероїдними протизапальними препаратами, інгібіторами протонної помпи, оскільки вони знижують вироблення соляної кислоти в шлунку;
• ознаки залізодефіцитної анемії;
• неясна тромбоцитопенія;
• можливість зараження членів сім’ї;
• контроль проведеного курсу антибіотикотерапії;
• з’ясування зв’язку з генетичною схильністю.

У дитини про ознаки зараження кажуть скарги на нудоту, незрозумілі болі в животі, поганий апетит і відмова від їжі, часте рясне зригування, а також здуття і бурчання живота.

Спосіб бактеріологічного посіву

Виділення культури збудника — мікробіологічний вид дослідження. Класика способу вимагає посіву матеріалу на живильне середовище, підрахунку вирослих колоній, дослідження мікроорганізму з колонії під мікроскопом. Також необхідно проведення біохімічних проб для вивчення його властивостей і додаткового посіву на середовище з антибіотиками для визначення чутливості до різних препаратів.

Середовище для посіву досить дорога, готується спеціально

Аналіз калу на хелікобактер пілорі з допомогою культурального способу провести складно:

• посів повинен відбуватися без доступу кисню;
• можна виділити тільки спіральні форми, які рідко потрапляють в кал, а не кокова;
• результати реакції на чутливість до антибіотиків in vitro (інвітро означає «на склі, у пробірці») на практиці виявляються оманливими і в деяких випадках не збігаються з фактичним застосуванням у пацієнта (in vivo), виявлений оптимальний антибіотик виявляється недостатньо ефективним;
• аналіз вимагає тривалого терміну (7-10 днів) для повного проведення.

З цих причин використання методу для діагностики обмежена.

Імунологічні способи дослідження

Суть імунологічного аналізу — виявлення комплексів антитіло+антиген, в якому чужорідним агентом є бактерії. Більш звично використання з дослідження крові. Але фактично непрямі ознаки наявності антигену можна підтвердити за наявності в стільці, слині, сечі, у вагітних в навколоплідної рідини.

В методиках використовуються готові «помічені» антитіла. При обробці ними калу пацієнта, що містить антигени (залишки хелікобактерії) виникає реакція з’єднання зі стандартними антитілами. Тривалість дослідження — добу. Аналіз калу на антиген хелікобактер призначається, якщо у пацієнта є будь-які симптоми порушення травлення.

Найбільш поширений варіант — первинний скринінг населення (обстеження всіх, хто звернувся, або певних груп), не має специфічних скарг. У Росії не застосовується через відсутність достатньої кількості імунологічних тестів у лабораторіях поліклінік.

Метод ПЛР

Полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР) відноситься до молекулярно-генетичної діагностики. З її допомогою виявляється не бактерія, а її специфічна ДНК. Навіть при малій кількості, в разі видужання або безсимптомного носійства метод дозволяє з достатньою точністю пов’язати зміни в організмі з дією хелікобактер.

Тривалість аналізу експрес-методом 5-6 годин, звичайним — 2-3 доби

Методика розрахована на штучний синтез окремих частин ДНК, подвоєння і побудова ланцюжка з 30 циклів. Процес не відбувається у разі відсутності найменших залишків біоматеріалу. Для реакції необхідний прилад ампликатор. Полімераза — фермент, що прискорює процес.

ПЛР калу призначають для підтвердження ролі хелікобактерії в патології і визначення доцільності специфічної терапії:

• при ерозіях і виразках шлунку, стравоході і дванадцятипалої кишці;
• шлунково-стравохідного рефлюксі (закидання вмісту у зворотному напрямку);
• атрофічному ураженні слизової шлунка;
• поліпах;
• пухлинах шлунка;
• виявлення спадкової схильності у разі наявності у родичів злоякісних пухлин органів травлення;
• контроль за результатами терапії антибіотиками.

Перевагами ПЛР калу можна вважати:

• високу чутливість та специфічність (визначаються відповідно 94% і 100%), реакція буває позитивною навіть при наявності 10 бактерій;
• простоту проведення;
• безпека для пацієнта, відсутність травматичності при заборі матеріалу;
• можливість визначення ДНК як в спіралеподібних, так і в кокова формах хелікобактерії;
• виділення і вивчення різних генетичних модифікацій, штамів.

Результат рідко видає псевдопозитивну інформацію при відсутності інфікованості людини.

Недоліки дослідження:

• не представляється можливість визначення оптимального антибіотика по чутливості;
• немає відмінностей між протікає гострим захворюванням і залишковими явищами після загострення, ДНК бактерій залишаються в калі майже місяць після клінічного одужання;
• чутливість все-таки нижче, ніж при дослідженні біоптату із стінки шлунка;
• порівняно висока вартість;
• необхідність підготовки персоналу та придбання обладнання;
• позитивна реакція у випадках забруднення персоналом матеріалу з чужого зразка (контамінація ззовні).

ПЛР-лабораторія має удосконалену техніку, що дозволяє отримати достовірні результати діагностики

Як оцінити результати аналізів?

Розшифровка результатів дослідження — справа лікаря спеціаліста. Не варто вдаватися до самостійної трактуванні або користуватися послугами знайомих. Оцінка проводиться за комплексом ознак. При ПЛР видається результат:

• негативний, якщо не виділився генотип хелікобактерії, виявляється в нормі;
• позитивний, якщо у пацієнта розпал захворювання або зараження було в анамнезі.

При бактеріологічному дослідженні:

• виявлено нульове кількість бактерій або хелікобактер відсутня;
• якщо кількість мікроорганізмів більше нуля — підтверджується хелибактериоз;
• знак S означає чутливість до заявленого антибіотика;
• R — вказує на стійкість (резистентність) до препарату;
• I — помірна чутливість.

Бакпосів калу дозволяє дати не тільки якісну, але й кількісну характеристику хеликобактериального зараження. Для цього враховуються мірі зростання бактерії:

• 1 ступінь — спостерігається слабке зростання на рідкому середовищі, на твердих зразках — зростання немає;
• 2 ступінь — виростає до 10 колоній;
• 3 ступінь — число вирослих колоній досягає 100;
• 4 ступінь — поширеність і активність збудника дуже активні, виростає більше 100 колоній.

Останні два ступені вважаються найбільш достовірними джерелами інформації про участь хелікобактер в патологічних змін шлунка.

Тестування проводять методом імуноферментного аналізу зі стандартними сироватками

Імунологічні тести показують негативний результат, якщо антиген збудника не визначається, позитивний — при наявності хелікобактеріозу. Достовірність імунологічного та культурального методів значно поступається ПЛР, для їх проведення необхідна масивна розповсюдженість збудника у фекаліях.

Як підготуватися до здачі аналізу?

Де можна здати аналіз, вкаже лікар. Він же повинен ознайомити пацієнта з правилами забору матеріалу і підготовки. Деякі приватні клініки видають відвідувачам надруковану інструкцію «Як здавати аналізи». Від додержання зазначених умов залежить результативність дослідження.

Загальними правилами забору фекалій на виявлення хелікобактер є:

• припинення прийому антибактеріальних засобів за три доби до аналізу;
• контрольну здачу аналізу калу проводять через місяць після закінчення курсу лікування;
• деякі аналізи вимагають за три дні до дослідження перейти на дієту без продуктів з харчовою клітковиною, виключити соління, алкогольні напої;
• заборона на використання проносних препаратів, ректальних свічок, якщо лікування вимагає щоденного прийому, потрібно попередити лікаря;
• збирати кал треба в чисту лабораторний посуд (видається в клініці або купується в аптеці), бажано відбір проб виробляти з трьох точок;
• вважається непридатним кал з домішками слизу, гною, крові, сечі;
• доставка матеріалу в лабораторію повинна бути забезпечена в перші 2 години, при необхідності дозволяється зберігати в холодильнику не більше доби при температурі від 2 до 8 градусів.

Спеціальний набір для забору калу на аналіз можна придбати в аптеці

Додаткові дослідження

Пацієнт при діагностиці не повинен наполягати на ізольованому дослідженні калу. Використовуючи додаткові види, лікар підвищує достовірність інформації про зараження хелікобактер.

Великою популярністю користуються уреазные дихальні тести.

Проведення імунологічних досліджень сироватки крові може бути порекомендовано у разі необхідності диференційної діагностики форми ураження.

Незаперечним видом обстеження є цитологічне дослідження зразка слизової шлунка, отриманого при біопсії під час фиброгастроскопического дослідження. При високій роздільній можливості мікроскопа лаборант бачить пофарбовану хеликобактерию.

Фиброгастроскопическая картина самої слизової з характерними ерозіями, атрофією, виразкою вказує на непрямі ознаки присутності збудника в шлунку. Рентгенологічна діагностика також дає щодо порушень у напрямку складок, контурів шлунка судити про органічної патології, викликаної хелікобактер.

За підсумками аналізів лікар може ввести пацієнта в групу ризику з підвищеною вірогідністю захворювання виразкою шлунка, злоякісними пухлинами. Попереднє застосування специфічного лікування дозволяє знизити ступінь ризику. При виборі медичної установи для виконання досліджень на платних умовах потрібно порадитися з приводу репутації і відповідальність його співробітників.